层流手术洁净室的环境和落菌日常检测只有动态和静态空气采样两种方式，下面介绍层流手术室(无尘室)静态空气采样检测法。
1、层流手术室(无尘室)静态空气采样方法：
（1）在无尘室当送风口集中布置时，应对手术区和周边区进行分别检测；当送风口分散布置时，按全无尘室统一布点方法检测。
（2）落菌沉降法采样时，用直径9cm的培养皿，在空气中暴露30分钟，37℃培养24h，培养皿中的菌落数（cfu）代表空气中沉降下来的细菌数，以个/皿表示。
（3）落菌浮游法采样时，用裂隙采样器在空气中随机采样30分钟，对采样皿或采样条培养得出的菌落数（cfu），代表空气中浮游下来的细菌数，以个/m3表示。
2、落菌采样高度：
（1）采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上；
（2）在手术区检测时应无手术台；当手术台已固定时，检测高度应在台面之上0.25cm。
3、布点方法：（见下图）
4、落菌采样注意事项：
（1）在100级无尘区域检测时，采样口应对着气流流动方向；在其他区域检测时，采样口均向上；
（2）采样后的培养基条或培养皿，应37℃条件下培养24h，并计算菌落数，菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位；
（3）每次落菌采样时间不应小于30分钟。
（4）不论用何种方法检测细菌浓度，都必须有两次空白对照。第一次用于检测培养皿或培养基条（每批一个对照皿（条））；第2次对操作过程做对照试验（每室或每区将1个对照皿（条），打开后又立即封盖，进行模拟操作）；两次对照结果必须为阴性，整个操作过程应符合无菌操作的要求。
（5）特别提示在:新房验收时，应最后做空气、物表细菌检测。
5、层流手术室环境细菌浓度和静压差日常监测：
根据最新GMP标准，层流手术室的设计建造标准越来越高，因此对层流手术室的日常环境管理和检测要每天都进行，保障术前术后的有效正常运行。下面介绍手术室的日常监测方法：
6、层流手术室空气日常监测方法：
要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（落菌沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。
（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90培养皿，暴露30分钟后，37OC培养24小时。
标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。单皿最大值不应超过平均值3倍。
（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。
标准：I级<30cfu/m3；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500 cfu/m3。
（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降0.5h后在37℃下培养24h。
标准：同回风口动态平板采样法标准。
（4）采样次数：按出台的洁净手术部医院管理控制规范执行。
7、表面染菌密度监测方法：
（1）采样时间：消毒后10分钟之内（各类洁净用房，作为静态实测数据）、各手术室手术结束后和各类洁净用房的上午10时。
（2）采样地点：有代表性地点，每个房间每种表面不少于2点（如手术台、桌、灯等）。
（3）采样及检测方法：按照《医院消毒卫生标准》（GB15982-1955）。
（4）标准：同回风口动态平板采样法标准。
8、医护人员手采样：每次抽检人数不少于3人
9、静压差监测方法：pa（帕）
（1）方法：仪器测定法。
（2）仪器：液柱式微压计，最小刻度2Pa。
（3）人员：一人持测定胶管并复核，一人操作仪器。
A、关门：应把洁净区域内所有的门关闭，最好有人守护。
B、测定：从手术室最里面洁净级别最高的房间依次向外测定，凡是可相通的相邻两室都要测定，一直测到可与室外相通的房间。应有一人在待测房间手持伸入该房间的胶管，使管口处于0.8m高度，管口端面垂直于地面，避开气流方向和涡流区。
C、检查：如果静压太小，不易判断正负，可用线头之类放在门缝外观察。
D、调节：如发现测出的压差未达到要求，可调节风口或阀门开关重测。
（5）监测标准 ：I、II级> 8pa；III、IV级> 5 pa；洁净区对非洁净区>10 pa。
（6）测定次数：根据需要随时检测并留有记录。
10、相对湿度监测：
夏季：不得连续2天> 60%，不得发生2次以上。
冬季：不得连续2天< 30%。不得发生2次以上。
综上所述：一般层流手术室对环境要求较高，因此必须对层流手术室的细菌浓度、静压差等指标性的常规项目进行日常监测，以保证层流手术洁净室能正常安全有效运行。
